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tarifs et quelques coordonnées de laboratoires

Composition du milieu (milieu vendu prêt à l’emploi par Difco,Biokar, AES... )

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La fluorescence est visible avec ce milieu
— Ensemencement en surface (0,1 ml) ou 1 ml dans la masse
— Température d’ incubation : 20-22°C pendant 5 jours
— Lecture : les Pseudomonas donnent des colonies vert-jaune fluo
— Confirmation : les Pseudomonas sont des bacilles gram-, catalase+, oxydase +

Pour confirmer à partir d’une colonie on réalise le test KOH : substitut de la coloration de Gram, il présente l’avantage d’être rapide à réaliser.

Une goutte de KOH à 3% est déposée sur une lame de verre. Un fragment de colonie est prélevé avec une anse ou une pipette Pasteur et placé dans la goutte de KOH. Si le mélange devient visqueux après 5 à 60 secondes, la souche est gram -.

Pour une souche de Pseudomonas présumée qui est Gram-, il faut réaliser deux autres tests pour confirmation : la catalase et l’oxydase.

La catalase

une colonie est dissociée dans de l’eau oxygénée (solution commerciale) ; la présence d’une catalase se traduit par un dégagement immédiat de bulles gazeuses.

L’oxydase

on utilise des disques prêts à l’emploi (Bio-Rad). Une colonie est déposée, à l’aide d’une pipette Pasteur, sur le disque (ne pas utiliser de matériel métallique). La présence d’oxydase (oxydase +) se traduit par une coloration rose-violette.

Après consultation des tarifs, dans divers laboratoires, on peut donner un ordre d’idée du prix pour une recherche de Pseudomonas dans le lait et les fromages (tarif 2004).

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